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CONDICIONES PARA EL ENVÍO DE MUESTRAS UNIDADES DE MICOBACTERIAS Y MICOLOGÍA MÉDICA

Codigos Bacteriologia                                       Codigos Micologia  Parte I    Parte II


1. Cultivo, exámenes directos y coloraciones especiales para micobacterias, micosis profundas y PCR para M. tuberculosis, P. jiroveci y H. capsulatum. 

Con el fin de optimizar la calidad del proceso de las muestras clínicas y lograr así suministrar resultados confiables, nos permitimos adjuntar las condiciones bajo las cuales deben ser recogidas y remitidas las diferentes muestras para cultivo, exámenes directos y coloraciones especiales para micobacterias, micosis profundas y PCR para M. tuberculosis, P. jiroveci y H. capsulatum.

Jugo gástrico
Recolección: se debe recoger la muestra en un recipiente estéril con tapa que tenga cierre seguro, idealmente entre 5-10 ml del jugo gástrico. Se recomienda procesar la muestra antes de cuatro horas, para evitar que la acción del HCl del contenido gástrico comprometa la viabilidad  de los bacilos presentes en la muestra, de no ser posible, ésta puede ser neutralizada con 100 mg carbonato de sodio (Na2CO3) que deben ser agregados en el recipiente en que es recogida la muestra. Esta cantidad de carbonato de sodio generalmente proporciona un pH muy básico.
Transporte: generalmente esta muestra es recogida en las primeras horas de la mañana (5:00am-6:00am) antes de suministrar cualquier alimento, por lo cual se debe tener la precaución de conservarla refrigerada mientras es enviada a la CIB.  Se recomienda un mínimo de tres muestras en días diferentes (seriadas) y enviar la muestra al laboratorio en las horas de la mañana.

Orina
Recolección: se debe recoger la muestra correspondiente a la primera micción de la mañana, previo aseo cuidadoso con agua y jabón de la región urogenital. El  volumen requerido es de 50 a 100 ml; el recipiente debe ser estéril, de boca ancha y tapa de cierre seguro.
Transporte: se recomienda su refrigeración (2-8°C) hasta ser enviada a la CIB. Es aconsejable enviar un mínimo de tres muestras tomadas en días diferentes (seriadas).
NOTA: Las muestras de orina deben ser enviadas el mismo día de su recolección, de lunes a viernes, de lo contrario no serán procesadas.

Esputos
Recolección: se debe instruir claramente al paciente sobre la manera de recoger la muestra, como sigue:
• Hacer previo aseo de la mucosa orofaríngea (cepillado de dientes).
• Obtener una expectoración que sea representativa del tracto respiratorio bajo, evitar muestras que solo contengan saliva.
• La muestra debe ser la primera de la mañana.

El recipiente donde se recoja la muestra debe ser estéril, de boca ancha y con tapa de cierre seguro.
Transporte: se recomienda la refrigeración hasta el momento del envió a la CIB. Se aconseja enviar un mínimo de tres muestras en días diferentes (seriadas). En caso de obtener la muestra en fines de semana y si se trata solamente de cultivo de Micobacterias, estas deben ser conservadas en refrigeración (no en congelación). Para  cultivo de hongos las muestras refrigeradas no son adecuadas debido a la proliferación rápida de flora comensal normal, puesto que en el proceso de las muestras para cultivo de hongos no se hace descontaminación previa.

Esputos inducidos
Recolección: en caso de no ser posible la recolección de una muestra adecuada de esputo, debe acudirse a la estimulación de la producción de esputo por medio de la nebulización con solución salina hipertónica. Esta muestra debe ser recogida en recipiente estéril y de boca ancha
Transporte: refrigerarla hasta su envió a la CIB.

Lavado bronquial- broncoalveolar
Recolección: debe ser recolectado en recipiente estéril, de boca ancha y con tapa de cierre seguro
Transporte: se recomienda la refrigeración hasta su envío a la CIB.

Liquidos  esteriles, biopsias y material purulento
Recolección: deben ser recolectados en tubo seco estéril con tapa rosca.
Transporte: se deben refrigerar hasta ser enviados a la CIB. En el transporte de la muestra debe asegurarse que los recipientes permanezcan en posición vertical para evitar derrames.
NOTA: Cuando se trata de líquidos pleurales, se debe adicionar al tubo de ensayo,  antes de tomar la muestra, anticoagulantes como heparina, oxalato de sodio o polianetol sulfonato de sodio (SPS), a una concentración de 1 mg/ml, para evitar su coagulación.
En cuanto al LCR, éste debe ser recibido directamente en tubo estéril con tapa rosca. No debe usarse tapón de algodón para evitar que el líquido se derrame y ocurra contaminación posterior. Para cultivo de Cryptococcus spp, el LCR debe ser conservado a temperatura ambiente (NO refrigerar) antes de ser remitido.
Biopsias: En caso de ser tomadas en el fin de semana o en horas de la noche y para evitar su desecación, se recomienda adicionar solución salina estéril para cubrirla. Se debe estar seguro que la solución salina sea estéril, para lo cual se recomienda mantenerla en alícuotas en volúmenes de 2 ml.


2. Inmunoflorescencia directa (IFD) de Bordetella pertussis: (b90)
Recolección: el aspirado nasofaríngeo debe ser recogido en tubo tapa rosca estéril
Transporte: debe ser enviado a los laboratorios de la CIB lo más rápido posible o conservarlo refrigerado a 4C hasta su envío, el cual debe ser manejado igual que para las muestras para Micobacterias.


3. Antígeno circulante de Aspergillus sp “Platelia”
MUESTRA: Suero
Recolección: Para suero se requiere un mínimo de 2 ml. (Sangría total de 6 a 8 ml). El coágulo debe separarse lo más pronto posible  para evitar la hemólisis de los glóbulos rojos. El paciente debe estar en ayunas.                                              
Transporte: Si los sueros van a remitirse a distancia, se coloca la sangre en tubo estéril seco (sin anticoagulante) y se deja a temperatura ambiente ya que en nevera se hemolizan los glóbulos rojos atrapados en el coágulo. Si existen facilidades en el sitio de remisión, el suero puede separarse en condiciones de esterilidad antes de su envío.


4. Niveles séricos para fluconazol, itraconazol, ketoconazol
MUESTRA: Suero
Recolección: sangrar al paciente en ayunas cuando éste lleve, al menos, 4 días de tratamiento continuo. La sangría debe hacerse 1 hora antes de tomar la dosis de la mañana.
Del suero se requiere un mínimo de 2 ml. (Sangría total de 6 a 8 ml). El coágulo debe separarse lo más pronto posible  para evitar la hemólisis de los glóbulos rojos.
Transporte: si los sueros van a remitirse a distancia, se coloca la sangre en tubo estéril seco (sin anticoagulante) y se deja a temperatura ambiente ya que en nevera se hemolizan los glóbulos rojos atrapados en el coágulo. Si existen facilidades en el sitio de remisión, el suero puede separarse en condiciones de esterilidad antes de su envío.


5. Serología para hongos por inmunodifusión y Serología para hongos “fijación del complemento”
MUESTRA: Suero y/o LCR
La fijación de complemento es una prueba que puede resultar anticomplementaria por múltiples razones, unas inherentes al paciente, a los tratamientos recibidos y muy especialmente a la calidad del suero, por ello le recordamos algunas precauciones.
SUERO
Recolección: el paciente debe estar en ayunas, se debe extraer la muestra de sangre según prácticas habituales, evitando la hemólisis.
Dejar que el coagulo se forme complemente antes de centrifugar. El plasma y los restos de fibrina y otros factores de la coagulación alteran los resultados.
Conservar los tubos cerrados para evitar contaminación.
Tras la centrifugación, extraer el suero en condiciones adecuadas de asepsia y conservarlo en un tubo cerrado estéril a 2- 8 ◦C, mientras se remite.
Los sueros hemolizados y/o contaminados activan el complemento inespecíficamente.
Transporte: si los sueros van a remitirse a distancia, se coloca la sangre en tubo estéril seco (sin anticoagulante) y se deja a temperatura ambiente ya que en nevera se hemolizan los glóbulos rojos atrapados en el coágulo. Si existen facilidades en el sitio de remisión, el suero puede separarse en condiciones de esterilidad antes de su envío.

 


LCR
Recolección: para el LCR se requiere un  mínimo 4ml.
Transporte: su envío debe hacerse en tubo tapa rosca estéril o con tapa hermética estéril (tipo inyectable) y nunca con tapón de algodón. Si la remisión es fuera de la ciudad se recomienda el envío del sobrenadante ya que la lisis de las células en el LCR puede producir resultados falsos positivos.


6. Latex para antígeno capsular de C. neoformans
MUESTRA: Suero y/o LCR
SUERO
Recolección: para suero se requiere un mínimo de 2 ml. (Sangría total de 6 a 8 ml). El coágulo debe separarse lo más pronto posible  para evitar la hemólisis de los glóbulos rojos. El paciente debe estar en ayunas.                                              
Transporte: si los sueros van a remitirse a distancia, se coloca la sangre en tubo estéril seco (sin anticoagulante) y se deja a temperatura ambiente ya que en nevera se hemolizan los glóbulos rojos atrapados en el coágulo. Si existen facilidades en el sitio de remisión, el suero puede separarse en condiciones de esterilidad antes de su envío.
LCR
Recolección: para el LCR se requiere un  mínimo 2ml.
Transporte: su envío debe hacerse en tubo tapa rosca estéril o con tapa hermética estéril (tipo inyectable) y nunca con tapón de algodón. Si la remisión es fuera de la ciudad se recomienda el envío del sobrenadante ya que la lisis de las células en el LCR puede producir resultados falsos positivos.


7. Examen directo nigrosina (tinta china)
MUESTRA: LCR
Recolección: del LCR se requiere un  mínimo de 2ml. Su envío debe hacerse en tubo tapa rosca estéril o con tapa hermética estéril (tipo inyectable) y nunca con tapón de algodón.                                            
Transporte: si el LCR se  va a remitir a distancia, se envía a temperatura ambiente ya que el C. neoformans es lábil a 4°C.


8. Cultivo para hongos causantes de micosis subcutáneas
MUESTRAS: Exudados de las lesiones, biopsias, aspirados, material purulento,  material costroso.
Recolección: Se aconseja enviar al paciente al laboratorio para la toma de las muestras. Las muestras de pus se toman asépticamente con jeringa estéril. Si se observa algún granulo, este debe incluirse en la muestra, pues permite el diagnóstico de los micetomas. Si el material obtenido es escaso debe resuspenderse en unas gotas de solución salina estéril. Si se trata de una biopsia debe guardarse en un tubo tapa rosca estéril, preferiblemente seco o con un poco de solución salina estéril.                                                      
Transporte: A excepción de las biopsias, se sugiere que las muestras sean tomadas en el
laboratorio. Si se trata de material purulento, éste debe resuspenderse en solución salina estéril y enviarse inmediatamente al laboratorio. Las biopsias que no pueden ser enviadas inmediatamente, deben guardase en refrigeración (4°C) en frasco estéril seco, pero por un
período máximo de 6 horas. Debe recalcarse que este tipo de muestra no debe fijarse con formol.
NOTA: Las muestras para micosis superficiales se tomarán en la Corporación para Investigaciones Biológicas


9. Concentración inhibitoria mínima para voriconazol, fluconazol, itraconazol y anfotericina B
MUESTRA: Aislamiento del hongo
Recolección: al aislamiento del hongo debe ser viable y puro.
Transporte: enviar el aislamiento del hongo en sabouraud agar.


10. Identificación de mohos y levaduras
MUESTRA: Aislamiento del hongo
Recolección: el aislamiento del hongo debe ser viable y puro.
Transporte: enviar el aislamiento del hongo en sabouraud agar.


11. Hemocultivo para hongos, M. tuberculosis y otras especies de micobacterias
Recolección: sangrar al paciente según las prácticas de asepsia en frasco de hemocultivo (MycoF/Lytic)
Tranporte: enviar en el menor tiempo posible y conservar a temperatura ambiente


12. Concentración inhibitoria mínima, pruebas de sensibilidad e identificación de especies de micobacterias
Las cepas deben ser enviadas viables y puras.
Transporte: su envío debe hacerse según las condiciones de transporte de material infeccioso. Deben estar empacadas en papel absorbente, bolsa de plástico sellada y en un recipiente rígido.  


MUESTRAS QUE SE RECHAZAN:

• Aplicadores de algodón seco: en Micología no se acepta ninguna muestra enviada en aplicadores de algodón.
• Muestras derramadas, en recipientes engrasados y con las características ya indicadas (tapón de algodón, de caucho o biopsias sobre gasas).
• Recipientes quebrados
o Recipientes con tapas que permitan fugas.
o Orinas de mas de 24 horas de recogidas.
o Orinas recogidas en recipientes inadecuados (botellas de gaseosa)


HORARIO DE ENVÍO:
Las muestras deben ser transportadas en recipientes de superficie dura y refrigeradas y que tengan en su interior gradillas en las que se puedan mantener en posición vertical y empacados individualmente en papel absorbente, para evitar derrames y prevenir así los accidentes de contaminación con agentes infecciosos para todo el personal involucrado en el proceso.
Las muestras deben  llegar a la CIB entre 7 am y 4 pm de lunes a viernes. Las muestras que lleguen entre las 4-5 pm, serán refrigeradas hasta el día siguiente para su proceso.

NOTA: Recordar que estas muestras NO son recomendables para cultivos  de hongos  por el sobrecrecimiento de la flora comensal normal, pues en el proceso de la muestra, la descontaminación no es posible, ya que los hongos no resisten este proceso.


NOTA: TODA MUESTRA REMITIDA DEBERÁ ESTAR DEBIDAMENTE ROTULADA  CON LOS DATOS SIGUIENTES:

• Nombre del paciente y apellidos completos
• Tipo de muestra
• Fecha de recolección

SE DEBE DILIGENCIAR ADECUADAMENTE EL FORMATO DE PROTOCOLO PARA REMISIÓN DE MUESTRAS.

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